品质保障》

一、操作步骤：
1.         加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。
为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
2.         弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液 100μl（取1μl生物素标记抗体加99μl生物素标记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制），37℃,60分钟。
3.         温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。
4.         每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液（同生物素标记抗体工作液） 100μl，37℃，60分钟。
5.         温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干。
6.         依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度蓝色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。
7.         依序每孔加终止溶液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8.         用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。 在加终止液后15分钟以内进行检测。
二、包装规格 96T×1/盒、96T×2/盒

三、预期用途 口蹄疫是由口蹄疫病毒（FMDV）感染引起的偶蹄动物共患的急性、热性、接触性传染病。在猪的预防免疫工作中，最值得关注的就是强化免疫的接种时机问题。 在过高的抗体水平进行免疫，过高的抗体水平还会中和疫苗，影响疫苗的免疫效果，导致免疫失败；在较低的抗体水平进行免疫，又会出现抗体保护真空期，威胁猪 的健康。

本试剂盒用于检测猪血清、血浆中猪口蹄疫病毒O型抗体，可用于猪口蹄疫病毒O型疫苗免疫效果评价。

四、试剂盒原理

   本试剂盒系由预包被猪口蹄疫病毒O型（OZK/93株+OS/99株）VP1表位多肽抗原的酶标板、酶标记物及其他配套试剂组成，应用酶联免疫法 （ELISA）原理检测猪血清、血浆样本中猪口蹄疫病毒O型抗体。实验时在酶标板中加入对照血清和待检样本，经温育后若样品中含有猪口蹄疫病毒O型抗体， 则将与酶标板上抗原结合，经洗涤除去未结合的其他成分后；再加入酶标记物，与酶标板上抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶标记物，在孔 中加TMB底物液，与酶反应形成蓝色产物，显色深浅与样品中的特异性抗体含量成正相关；加入终止液终止反应后，产物变为黄色；用酶标仪在450nm波长测 定各反应孔中的吸光值，即可知样品是否含有猪口蹄疫病毒O型抗体。

五、试剂盒组成

酶标板、酶标记物、样品稀释液、浓缩洗涤液、底物液A、底物液B、阳性对照、阴性对照

六、储存及有效期

于2～8℃避光保存，有效期为12个月。

包被板开封后请于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限为2个月。

七、适用仪器  含450nm、630nm波长的酶标仪，37℃恒温设备，可调微量移液器。